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雪峰虫草性状和显微特征研究

分类:虫草文献 作者:阳光虫草 评论:0 热度: 21,732 ℃

阳光虫草

雪峰虫草性状和显微特征研究

雪峰虫草性状和显微特征研究

[摘要]该文应用性状和显微鉴定法,对雪峰虫草不同批号样品的子座和虫体性状、组织、表面和粉末进行观察。研究发现雪峰虫草的形态、大小、腹节环纹等性状特征明显,虫体体表菌丝、体壁纹理、腹足趾钩等表面显微特征为稳定的鉴别特征,可作为雪峰虫草的鉴别依据,其中腹足趾钩呈椭圆形二行环,内环趾钩呈长条形,外环趾呈钩状具有特异性。

[关键词]雪峰虫草;性状;显微特征;腹足趾钩

studies on macroscopic and microscopic characteristics of

ophiocordyceps xuefengensis

liu hao1, zhen lan-ping1, zhu ru-cai1, zhang shui-han1*, huang hui-yong2*

(1.hunan academy of chinese medicine institute of chinese materia medica, changsha 410005, china;

2. hunan university of chinese medicine, changsha 410208, china)

[abstract]the macroscopic characteristics, tissue, caterpillar body wall and powder of ophiocordyceps xuefengensis in different batch numbers were observed and researched by the macroscopic and microscopic identification methods. the result shows that the morphology, size, abdominal annulations of caterpillar, etc. of o. xuefengensis are the macroscopic identification characteristics, the caterpillar body surface mycelium, body wall sculpture and crochets on abdominal legs are the microscopic identification characteristics. these characters are stable and regular discriminant features, which are proved to be the identification basis of o. xuefengensis. in addition, the characters such as crochets on abdominal legs arrange in two parallel ellipse rings, the inner crochets are long strip, and the external toes are unciform, are specific.

[key words]ophiocordyceps xuefengensis; characters; microscopic characteristics; crochets on abdominal legs

doi:10.4268/cjcmm20151425

雪峰虫草为真菌新类群线虫草菌科雪峰虫草菌ophiocordyceps xuefengensis t.c. wen, r.c. zhu, j.c. kang & k. d. hyde;[1];寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座和幼虫尸体的干燥复合体。生于海拔300~1 000 m阔叶林中的马鞭草科植物大青clerodend阳光虫草阳光虫草

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rum cyrtophyllum turcz.近地面根或茎中,主要分布于湖南省洞口县、隆回县等雪峰山区。雪峰虫草作为瑶药使用历史悠久,当地群众通过蒸煮、炖肉、泡酒的方式服用,具有补肺益肾、止咳化痰的功效,主要用于肺部疾病,如肺炎、哮喘、百日咳、干咳、热咳等,配伍后对高血压、病毒性肝炎、类风湿性关节炎、痛风等疾病亦有良好的疗效;[2];。

本课题的其他研究发现雪峰虫草与冬虫夏草亲缘关系最近;[1];,其有效成分和药效学的对比结果显示,两者具有相同的腺苷、虫草素、虫草酸、多糖、氨基酸等化学成分,功效类似。冬虫夏草生长环境严苛,难以人工培植,长期过度采挖野生资源,已造成资源濒危,生态破坏等诸多问题,而雪峰虫草资源丰富,环境适应性强,应用前景广阔。为建立雪峰虫草准确鉴定方法,本课题开展了对不同批次的雪峰虫草样品性状和显微特征的研究。

1材料

雪峰虫草样品均采自湖南省邵阳市洞口县(表1),采集人朱如彩、黄明和、袁子华等。所有样品经贵州大学西南药用生物资源教育部工程研究中心文庭池博士、湖南师范大学周琼博士与湖南省中医药研究院朱如彩研究员鉴定。

canon 550d相机、canon ef 100 mm f/2.8l is usm微距镜头,olympus sz61体视显微镜,olympus cx31光学显微镜,coms数码成像系统,leica rm2265石蜡切片机,lecia烘片机,leica dm6000b 荧光显微镜,ipp6.0图像分析软件,photoshop cs 4.0软件,烘箱等。

2方法

2.1性状观察 水浸润样品后,用解剖针除去表面残留杂质,置60 ℃烘箱烘干,观察药材性状,随机从各批号样品中选20个用游标卡尺测量大小,数码相机拍照,记录。部分特征采用olympus sz61体视显微镜及数码成像系统观察和拍照。

2.2显微观察

2.2.1组织形态将样品复水后进行分割(横切和纵切),放入faa固定液(70%乙醇-乙酸-甲醛90∶5∶5)浸泡24 h以上。进行常规石蜡切片流程,切片厚度10~20 μm。经番红~固绿双重染色,中性树胶封片。用leica dm6000b荧光显微镜观察、拍照,用ps软件进行图片的合成和后期处理。

2.2.2表面特征将样品置50%乙醇中泡软后,用镊子撕取虫体第3腹节背侧、体侧、腹侧足部表皮观察部位,置于载玻片上,滴加水合氯醛后加热透化,至颜色变浅或半透明,再滴加少量稀甘油,加盖玻片,冷却后置olympus cx31光学显微镜和数码成像系统下观察,用tsvise7拍摄软件测量特征数据,测量个数均为20个。

2.2.3粉末特征将材料的子座和虫体分开粉碎,过80目筛,水合氯醛透化后分别置于光学显微镜下观察,记录特征、测量数据,测量个数均为20个。

3结果

3.1性状特征

子座圆柱形,黄棕色,长3.0~46.0 cm(10.1 cm),宽0.2~0.7 cm(0.3 cm),1~4个子座从寄主头部、尾部或者其他部位(主要是头部)长出,多为单生、少丛生或散生,有的呈分枝状,通常2~6个分枝,亦可见多个分枝;可孕部少见,呈圆柱形,黄棕色至深棕色,有的呈分枝状,无不孕顶端,长2.0~20.0 cm(12.0 cm),宽0.2~0.4 cm(0.3 cm),子囊壳表生,长卵圆形。

虫体似蚕,略弯曲,长3.0~15.0 cm(7.6 cm),宽0.3~1.2 cm(0.9 cm),表面黄棕色至深棕色,分为头部,胸节和腹节3部分,有的被棕黄色绒毛(光学显微镜观察为菌丝),体表有众多黄棕色至深棕色瘤状凸起。头部棕黑色,具光泽。胸节第1节为深棕色,第2,3节为黄棕色,胸足3对,呈圆锥状弯曲,具节,易脱落。腹节背侧环纹明显,依次呈弧形排列,将每腹节分为3~4小节,第1小节较宽,第2~4小节较窄,形成“一宽二窄”或“一宽三窄”的形态,宽环背侧有长椭圆形深棕色或棕褐色斑块,具光泽;腹足8对,其中第3至第6对明显,呈乳头状隆起,顶面观呈椭圆状,边缘黄棕色至深棕色,内部密被棕黄色绒毛。臀足1对,略呈钩状回弯,形态与腹足相似。虫体两侧下缘各具棕褐色椭圆环状气门9个,近头部1对较大,1~8腹节各具1对,较小,气门内部密被棕黄色绒毛。质脆,易折断,断面略平坦,淡黄白色,可见残留内脏痕迹。具蘑菇样气味,味微苦(图1)。

3.2组织形态

3.2.1子座横切面:子座由菌丝组成,内部结构较疏松,近无色;外层结构紧密,黄棕色至深棕色。纵切面:子座结构分内外2层,内部由纵向平行或略有交织的无色菌丝组成;外层由黄棕色至深棕色交织状菌丝组成。子囊壳表生,长卵圆形,基部有基柄连接到子座,子囊壳内着生长线形子囊孢子。

3.2.2虫体横切面:虫体外层为体壁细胞,虫体内部充满菌丝,无明显的组织分化,结构较疏松。体壁细胞黄棕色至深棕色,厚约100 μm,有的体壁细胞隆起呈瘤状。体壁细胞外残存疏松的黄棕色菌丝,体壁细胞内侧的菌丝黄色,密集交织状,体内菌丝颜色由外向内逐渐变浅,至近无色,排布疏松。纵切片:虫体内由交织状的无色菌丝组成(图2)。

3.3表面特征

3.3.1体壁体壁表面密被菌丝,并散布深棕色或红棕色团块物(图3)。

体表菌丝细长,有隔,间隔长22.6~42.5 μm(30.1 μm),弯曲交织,有的顶端或侧面膨大,呈椭圆

1~9.虫体表面显微特征;10~16.粉末显微特征;1.体表菌丝(a, b.菌丝特征);2.体壁(a.团状物;b.雕纹);3.气门周围刺状毛;4.体壁状毛脱落后残存凹窝;5.腹足;6.外侧腹足趾钩顶面观;7.外侧腹足趾钩侧面观;8.内侧腹足趾钩顶面观;9.内侧腹足趾钩顶面观;10.体壁碎片;11~12.子座菌丝;13~15.虫体菌丝;16.刺状毛。

3.3.2腹足部足部顶面观呈椭圆形,内侧较外侧窄,其上密布菌丝,具趾钩。趾钩棕褐色,呈两环同心椭圆形均匀排布(椭圆形二行环;[3];),内环趾顶面观呈长条形辐射排列,靠近圆心端趾凸起成钩,背向圆心弯曲,较钝,另一端未凸起埋于体壁细胞下;外环趾钩弯曲,弯曲方向同内环趾钩,较内环趾钩略尖,短于内环趾钩(图3)。

3.4粉末特征

本品粉末淡黄色或棕黄色。虫体体壁细胞黄棕色或深棕色,细胞界限不明显,具镂空雕纹,散布深棕色或红棕色团块物。子座菌丝无色至黄色,细长,稍弯曲,隔明显,隔间长17.2~50.2 μm(33.0 μm),直径约4 μm;子囊孢子细长线形,壁具有很多横隔。虫体菌丝近无色或黄棕色,细长,弯曲,交织状,无色菌丝壁较薄,有隔,不明显,顶端稍膨大,偶见分支,直径约4 μm;黄棕色菌丝壁较厚,有隔且明显,顶端或侧面有的膨大,呈椭圆形或类圆形,中间有凹沟。刺状毛黄棕色(图3)。

4讨论

雪峰虫草虫体和子座的大小相差较大。疖蝙蛾2~6龄幼虫皆可感染雪峰虫草菌,龄期跨度大,造成雪峰虫草的虫体大小差异较大;在雪峰虫草产地,当地群众不分子座的生长年限采集雪峰虫草作药材用,造成子座的大小差异也较大。

雪峰虫草虫体表面的菌丝形态特征不同于虫体和子座内的菌丝。雪峰虫草体表菌丝顶端或侧面膨大,呈椭圆形或类圆形,中间有凹沟,这种形态特征是虫体和子座内部菌丝所没有的。雪峰虫草的寄主疖蝙蛾具有发达的吐丝器;[4];,雪峰虫草体表的菌丝是否为疖蝙蛾幼虫在其共生植物马鞭草科大青的近地面根或茎中产生有利于生活的特殊形态,是否与虫体和子座内的菌丝为同一种菌丝,有待于进一步研究。

雪峰虫草虫体足趾钩的排列方式不同于其他类虫草,可作为鉴别依据。趾钩的有无、分布和排列是鳞翅目幼虫鉴别的重要特征,常被作为鳞翅目幼虫的分类依据;[3-5];。雪峰虫草的腹足趾钩排列具有特异性,呈椭圆形二行环,内环趾钩呈长条形,外环趾钩明显;而冬虫夏草为类圆形多行环,内环趾钩呈短条形,外环趾钩明显;亚香棒虫草为长扁圆形多行环,内环趾钩呈条形,外环趾钩明显;新疆虫草为类圆形多行环,内环趾钩呈短条形,外环趾钩不明显,呈圆点状;戴氏虫草为长扁圆形多行环,内环趾钩呈条形,外环趾钩明显;凉山虫草为扁圆形单行环、二行环或多行环,趾部多内陷于腹足内,趾钩不易见。此外雪峰虫草的体壁表面纹理,子囊壳的形态、着生方式、无不孕顶端,虫体形态、大小、腹节环纹等特征也异于其他虫草 [5-7],这些显微和性状特征均可作为雪峰虫草区别于其他虫草类药材的鉴别依据。

[参考文献]

[1]wen t c, zhu r c, kang j c, et al. ophiocordyceps xuefengensis sp. nov. from larvae of phassus nodus (hepialidae) in hunan province, southern china[j]. phytotaxa , 2013,123 (1): 41.

[2]黄明和. 雪峰虫草探索读本[m]. 北京:光明日报出版社,2012:20.

[3]陆近仁,管致和,吴维均.鳞翅目幼虫分科检索表[j].中国昆虫学报,1951(1):321.

[4] 朱弘复,王林瑶,韩红杏.中国动物志. 第38卷[m].北京:科学出版社,2004:82.

[5]康帅,张继, 林瑞超. 冬虫夏草的性状和显微鉴定研究[j]. 药学学报, 2013, 48 (3): 428.

[6]陈小秋,刘宝玲,赵中振,等. 冬虫夏草与其混淆品的性状及显微鉴别研究[j].中国中药杂志,2011,36(9):1141.

[7]康帅. 冬虫夏草与其混淆品的生药学鉴别研究[d].北京:中国食品药品检定研究院,2011.

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