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虫草制品中核苷类有效成分分析方法研究

分类:虫草文献 作者:阳光虫草 评论:2 热度: 37,723 ℃

阳光虫草

虫草制品中核苷类有效成分分析方法研究

虫草制品中核苷类有效成分分析方法研究

摘要:采用hplc法建立测定虫草中11种有效成分的分析方法。采用碳十八色谱柱,甲醇和磷酸盐水溶液进行梯度洗脱,11种有效成分分别为:胞嘧啶、尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤、鸟苷、2’-脱氧胸苷、腺苷、虫草素。考察了方法的线性范围、稳定性以及仪器的精密度。 试验数据显示上述指标均在可接受的范围内。

关键词:反相高效液相色谱法;冬虫夏草;北冬虫夏草;金水宝胶囊;宁心宝胶囊;核苷类物质

中图分类号:q525文献标识码:adoi编码:10.3969/j.issn.1006-6500.2011.01.010

research on analytic methods of nucleotides in cordyceps preparation

chen wei1,huang kai-hua1, fu ting2, zhou qing-lin3, gao xin-hua1, zhang hong-xia1

(1. plant protection research institute,shanghai academy of agricultural sciences,shanghai 201106,china;2. analysis and testing center, shenyang agricultural university, shenyang, liaoning 110161, china, 3. fuxin forest technology extension station, fuxin, liaoning 123000, china)

abstract:a high performance liquid chromatographic(hplc) method was developed for the determination of nucleotides. meanwhile, a comparative analysis of nucleotides in cordyceps preparation was conducted by the developed method. results showed that a good separation of cytosine, uracil, hypoxanthine, uridine, thymine, adenine, inosine, guanidine, 2’-thymidine, adenosine, cordycepin were achieved. this method was stable, precise and reproducible and was successfully applied to the determination of nucleosides in cordyceps preparation.

key words: hplc; cordyceps sinensis; cordyceps militaris; jinshuibao capsule; ningxinbao capsule; nucleotides

冬虫夏草(cordyceps sinensis)隶属麦角菌科虫草属,是一种极具保健功能的药用真菌[1-2],具有调节人体免疫系统活性、抗肿瘤活性、调节肾功能、恢复肝功能、调节心血管功能等功效,但冬虫夏草对生长环境的要求比较苛刻,价格昂贵,因此具有相似生理功效的其他虫草类制品便获得广泛的应用[3-4]。

以往研究实践表明,不同来源的虫草制品在有效成分种类及其含量上存在些许差异,目前对其的研究仅限于虫草酸、虫草多糖及少量的核苷类物质如虫草素、腺苷等,偶见对多种核苷类有效成分进行分析研究的报道[5-7],但各组分之间分离度比较差。本试验拟采用反相高效液相色谱法[8-13]对11种核苷类物质进行分析测试,以达到质量综合评价的目的。试验结果表明,11种核苷类物质在同一色谱条件下均得到较好的分离,并可以进行含量测定,该方法简便、准确、重复性好,可以作为判定虫草制品质量的一种方法。

1材料和方法

1.1仪器与试剂

summit液相色谱仪(美国戴安公司,包括p680型四通道低压泵,asi-100自动进样器,tcc-100柱温箱,uvd170u紫外检测器,变色龙(chromeleon)色谱工作站); 德国sartorius bs 210s电子天平;kq-500db数控超声波清洗器;effend阳光虫草阳光虫草

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标准品:胞嘧啶、尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、2’-脱氧胸苷、腺苷、虫草素,均购自美国sigma公司,色谱纯甲醇,购自美国sigma公司;超纯水为自制。所有溶剂均经过0.22 μm滤膜过滤并超声后使用。北冬虫夏草子实体由本实验室生产,冬虫夏草购自西藏那曲,金水宝胶囊(江西济民可信金水宝制药有限公司),宁心宝胶囊(长春普华制药股份有限公司)。

1.2样品前处理

精确称取0.5 g试样,80 ℃水浴2 h,定容至50 ml,用0.22 μm滤膜过滤后进样。每次分析均需同时做试剂空白。

1.3标准溶液配制

准确称取11种有效成分的标准物质各10 mg,经超纯水溶解后,用50 ml容量瓶定容,配置成200 μg・ml-1的标准溶液,再分取该溶液用超纯水逐级稀释成100,50,20,10 μg・ml-1系列标准溶液,然后用0.22 μm滤膜过滤后分别进样。

1.4色谱条件

色谱柱:cnw silc18 柱(4.6×250 mm,5 μm);流动相:甲醇与磷酸二氢钾溶液梯度洗脱;柱温:25 ℃;检测波长:260 nm;进样量:10 μl。

2结果与分析

2.1流动相的选择

主要考察了几组的流动相:甲醇∶水(体积比为15∶85);乙腈∶水(体积比为4∶96);1‰三氟乙酸∶甲醇体积比为(15∶85);0.01 mol・l-1磷酸二氢钾∶甲醇(体积比为15∶85);0.01 mol・l-1磷酸二氢钾:甲醇(梯度洗脱)。结果显示,前两组流动相中色谱峰拖尾现象比较严重,分离度比较差;第3组流动相色谱峰分离度较好,但重复性比较差;第4组色谱峰重复性较好,但个别峰分离度差;因此选择第5组梯度洗脱方式,各色谱峰的分离度及重复性都比较好。

2.2标准曲线及线性范围试验

在上述色谱条件下, 用标准液系列中各组分的峰面积与浓度数据作标准曲线。试验证明,11种标准样品在10~200 μg・ml-1范围内线性关系良好。各组分相关系数均达0.999以上,完全满足定量分析的需要。

2.3精密度、稳定性试验

在上述色谱条件下,对11种标准溶液测定5次, 以峰面积计算 rsd值,试验数据显示,各标准样品的rsd值在0.98%~1.96%之间,表明试验精密度良好。

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