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虫草菌丝粉粗多糖含量测定方法研究

分类:虫草文献 作者:阳光虫草 评论:2 热度: 40,499 ℃

阳光虫草

虫草菌丝粉粗多糖含量测定方法研究

虫草菌丝粉粗多糖含量测定方法研究

摘 要:本文以虫草菌丝粉为材料,比较了超声提取与沸水浴提取对虫草粗多糖得率的影响,以及水浴时间、沉淀多糖的乙醇浓度、醇沉时间对粗多糖得率的影响。研究结果表明沸水浴提取较超声提取粗多糖得率高,水浴时间应控制在5h左右为宜,乙醇浓度宜选择100%,时间应为6h左右为宜。

关键词:虫草;菌丝;多糖测定

中图分类号:r284 文献标识码:a doi:10.11974/nyyjs.20160632008

虫草多糖是虫草体内含量最丰富、最重要的生物活性物质之一,虫草多糖是由甘露糖、虫草素、腺苷、半乳糖、阿拉伯糖、木糖精、葡萄糖、岩藻糖组成的多聚糖。本文从以下几个方面对虫草多糖测定方法进行了粗浅的摸索:超声提取与沸水浴提取的比较;沸水浴时间不同对粗多糖提取得率的影响;不同浓度的乙醇沉淀粗多糖对多糖得率的影响;醇沉不同时间对粗多糖得率的影响。现将实验结果总结如下:

1 材料和方法

1.1 材料

虫草菌丝粉,购自西安双德生物有限公司。

1.2 试剂

葡萄糖(中国食品药品检定研究院)、乙醇、硫酸(固安新欣化工有限公司)、苯酚(天津大学科威公司)。

1.3 仪器

超声波清洗器、恒温水浴锅、岛津uv2550紫外分光光度计、离心机。

1.4 供试品溶液的制备

取虫草菌丝粉约1.0g,精密称定,置100ml量瓶中,加水80 ml,超声或100℃热水浸提,加水定容至100 ml,过滤后收集滤液,取滤液5ml,加4倍体积的乙醇,4℃静置,离心收集沉淀,准确加入25 ml水溶解沉淀。

1.5 粗多糖的测定――苯酚硫酸法[3]

1.5.1 标准曲线的制备

精密吸取浓度为0.1mg/ml的葡萄糖标准溶液0、0.20、0.40、0.60、0.80、1.0ml,分别置于10ml具塞试管中,各加蒸馏水使体积为1.0ml,再加苯酚溶液(5%)1.0ml,摇匀,迅速滴加浓硫酸5.0ml,振荡摇匀后置沸水浴中加热15min,取出具塞试管,迅速冷却至室温,在490nm波长处测定吸光度。同时以蒸馏水如上法配制空白液。以葡萄糖标准液中葡萄糖的绝对质量为横坐标,以吸光度为纵坐标,用加权最小二乘法进行回归运算,求得直线回归方程。

1.5.2 样品溶液测定

吸取按1.4方法制备的供试品溶液适量,置于10ml具塞试管中,按1.5.1法自“各加蒸馏水使体积为1.0ml,……”至“……在490nm波长处测定吸光度”操作,测定供试品溶液吸光度,根据标准曲线所确定的回归方程,计算供试品溶液中粗多糖的含量。

2 结果

2.1 超声不同时间对粗多糖提取率的影响

取虫草菌丝粉约1.0g,精密称定,置100ml量瓶中,加水80ml,超声20min、40min、60min、90min后过滤,滤液加4倍无水乙醇,4℃静置6h后,离心收集沉淀,准确加入25ml水溶解沉淀。采用苯酚硫酸法分别测定粗多糖含量(结果如表1)。

从表1可知,超声60min,所提取的粗多糖含量达到最大值,随着超声时间的延长,含量增加幅度不大,并且有减小的趋势。原因可能是由于超声波具有较强的机械剪切作用,长时间的作用会使大分子的多糖断裂,从而影响多糖得率[4]。故采用超声提取粗多糖时,超声时间选择在60min为宜。

2.2 100℃热水浸提不同时间对粗多糖提取率的影响

取虫草菌丝粉约1.0g,精密称定,置100ml量瓶中,加水80 ml,100℃热水中浸提1h、2h、3h、5h、8h,滤液加4倍无水乙醇,4℃静置6h后,离心收集沉淀,准确加入25ml水溶解沉淀。采用苯酚硫酸法分别测定粗多糖含量(结果见表2)

从上图可知,热水浸提5h,粗多糖得率达到最大值,随着水浴时间的延长,得率增加缓慢,故从节省检测时间及节约能源角度考虑,采用水浴浸提,时间应控制在5h左右为宜。

2.3 醇沉不同时间对粗多糖提取率的影响

取虫草菌丝粉约1.0g,精密称定,置100ml量瓶中,100℃热水中浸提5h后,滤液加4倍无水乙醇,4℃静置2h、4h、6h、8h、12h后,离心收集沉淀,准确加入25 ml水溶解沉淀。采用苯酚硫酸法分别测定粗多糖含量(结果见表3)。

从上图可知,随着沉淀时间的延长,粗多糖的得率增加,无水乙醇沉淀6h后,得率增加缓慢,故乙醇沉淀时间选择在6h为宜。

2.4 醇沉浓度对粗多糖提取率的影响

取虫草菌丝粉约1.0g,精密称定,置100ml量瓶中,100℃热水中浸提5h后,滤液加4倍体积的浓度分别为60%、85%、95%、100%乙醇,4℃静置6h后,离心收集沉淀,准确加入25ml水溶解沉淀。采用苯酚硫酸法分别测定粗多糖含量(结果如表4)。

从表4可知,乙醇浓度在100%,粗多糖得率最高,随着乙醇浓度的减少,得率下降。故醇沉浓度应选择在100%为最佳。

2.5 显色稳定性

取虫草菌丝粉约1.0g,精密称定,置100ml量瓶中,100℃热水中浸提5h后,滤液加4倍无水乙醇,4℃静置6h后,离心收集沉淀,准确加入25 ml水溶解沉淀。采用苯酚硫酸法,加入规定量苯酚、硫酸显色,每隔30min测定吸光度。结果见下表:

从表5可知,供试品溶液加入规定量的苯酚、硫酸显色后,在2h内测定,粗多糖含量结果较为稳定。

3 结论

由上述实验结果可知,在进行虫草菌丝体粗多糖提取时,超声提取虽然较沸水浴提取节省时间,但前者粗多糖得率比后者低很多,故沸水浴提取应为虫草菌丝体粗多糖提取的首选方法。从节省检测时间及节约能源角度考虑,沸水时间应控制在5h左右为宜。在对粗多糖进行沉淀时,乙醇浓度宜选择无水乙醇,时间控制在6h左右为宜。

参考文献

蛹虫草于2009年被批准成为新资源食品,提取成分被用于食药两用,未提取的草体目前仅见于用于食品及保健食品领域,其中的提取成分蛹虫草菌粉被用于药·品领域!
[1]蛹虫草在保健品领域的应用请见方解蛹虫草保健品 栏目中详细介绍目前蛹虫草在保健品领域的应用!
冬·虫·夏·草为藏药材,食用需要谨慎或在医生的指导下服用,目前冬·虫·夏·草仅限用于药·品.
[1]冬·虫·夏·草在药·品领域的应用请见方解冬·虫·夏·草·药·品 栏目中详细介绍目前冬·虫·夏·草在药·品领域的应用!

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