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比色法测定冬虫夏草和蛹虫草中多糖和甘露醇的含量-2

分类:虫草文献 作者:阳光虫草 评论:2 热度: 7,209 ℃

阳光虫草

比色法测定冬虫夏草和蛹虫草中多糖和甘露醇的含量

比色法测定冬虫夏草和蛹虫草中多糖和甘露醇的含量

应用苯酚-硫酸法、3,5-二硝基水杨酸法和高碘酸钠氧化法建立虫草多糖和甘露醇的定量分析方法,并比较市售天然冬虫夏草和人工栽培蛹虫草在多糖和甘露醇含量上的差异。结果发现,用比色法测定三种天然虫草和六种蛹虫草中多糖和甘露醇的含量,其多糖平均加样回收率分别为:94.7%(rsd为2.29%),甘露醇的含量平均加样回收率为98.8%(rsd为1.79%)。实验表明,本研究方法可用于虫草多糖和甘露醇的定量分析。

冬虫夏草; 蛹虫草; 虫草多糖; 甘露醇; 比色法

s567.35a

冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草cordyceps sinensis(berk.)sacc.寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体,为我国名贵的滋补强壮中药。近代医学认为,冬虫夏草能治劳咳痰血、盗汗、阳痿、遗精、黄疸病、肺结核及老人衰弱慢性咳喘等,有强壮而兼收镇静之效果。所含的冬虫夏草多糖能提高机体的免疫功能,并提高血清的皮质酮含量,促进机体核酸及蛋白质的代谢,具有抑瘤作用[1、2]。所含的d-甘露醇具有利尿脱水、镇咳、祛痰和平喘之功效[3][4]。目前由于过度挖掘,导致了生态环境的严重破坏,因此其替代品人工栽培的的蛹虫草(cordyceps militaris)日益受到人们的重视。本实验用比色法测定了冬虫夏草和蛹虫草中多糖和甘露醇的含量,为冬虫夏草和蛹虫草质量品质的评价研究提供了科学依据。

1 仪器和试剂

1.1σ瞧

万分之一分析天平spectrophotometer du640,mettler ae200,十万分之一分析天平sartorius bp211d,xw-80a 涡旋混合器购自上海医科大学仪器厂产品。

1.2κ约

醋酸胺、冰醋酸、乙酰丙酮、高碘酸钠、3,5-二硝基水杨酸、重蒸苯酚、亚硫酸钠、氢氧化钠和酒石酸钾钠等均为国产分析纯试剂。标准品葡萄糖为美国sigma公司产品,甘露醇(分析纯)为国药集团化学试剂有限公司产品,l(+)-鼠李糖为中国医药(集团)上海试剂公司产品。

1.3τ娌菅品

t1购自上海雷允上饮片厂的冬虫夏草原料;t2购自上海神象饮片厂的冬虫夏草原料;t3购自上海徐重道饮片厂的冬虫夏草原料;j1,j2,j3,j5和j6为上海农科院提供的蛹虫草;j4为市售蛹虫草。

2 实验方法与结果

2.1χ嗵堑暮量测定

2.1.1ψ芴堑暮量测定

2.1.1.1 供试品溶液的制备

将样品低温干燥后,捣碎,取0.1 g,精密称定,加20 ml蒸馏水,称重,沸水浴加热4小时,冷却至室温,蒸馏水补足重量。过滤,取续滤液,备用。

2.1.1.2 对照品溶液制备

称取干燥至恒重的葡萄糖对照品,用蒸馏水配置成52.5 μg/ml①和1009 μg/ml②的对照品溶液。

2.1.1.3 线性关系考察

取①浓度对照品溶液0.2,0.4,0.8,1.6,2.0 ml,加蒸馏水1.8,1.6,1.2,0.4,0 ml至2.0 ml,取②浓度对照品溶液0.2,0.4, 0.8,1.0 ml,加蒸馏水1.8,1.6,1.2,1.0 ml至2.0 ml。按“2.1.1.8”项下操作。以浓度为横坐标,吸光值为纵坐标绘制标准曲线,回归方程为:y=0.0074x+0.0069,r2=0.9998。结果表明葡萄糖在5.25 μg/ml~504.5 μg/ml呈良好的线性关系。

2.1.1.4 精密度实验

一定浓度的葡萄糖对照品溶液,重复测量6次,吸光值的rsd为0.10%。

2.1.1.5 稳定性实验

取供试品溶液(蛹虫草3),分别在2,4,6,8,10,24,48 h,进行测定,吸光值的rsd为1.74%,证明虫草中总糖在48 h内稳定。

2.1.1.6 重复性试验

取1号冬虫夏草样品,分别称取6份,按2.1.1.1项下制备,按2.1.1.8项测其吸光值,6份样品的总糖含量的平均值为11.8%,rsd为3.49%。

2.1.1.7 加样回收实验

取含量已知的冬虫夏草样品t1 0.05 g,精密称定(n=6),分别加入100%量的葡萄糖,按供试品溶液制备项下方法制备和样品测定项方法测定,其计算公式为:回收率(%)=(测得值-样品中还原糖)-(样品中总糖-样品中还原糖)/ 加入值×100,平均回收率为94.7%,rsd为2.29%(表1)。

2.1.1.8 样品总糖测定

吸取供试品溶液1 ml,转移至10 ml量瓶中,蒸馏水定容至10 ml。吸取2 ml至具塞试管中,加入1 ml 6%重蒸苯酚,5 ml浓硫酸,混匀,室温放置10 min,40 ℃水浴15 min,冷却至室温,摇匀,在490 nm处测定吸光值。

2.1.2还原糖的含量测定

2.1.2.1 对照品溶液制备

称取干燥至恒重的葡萄糖对照品,用蒸馏水配置成1009 μg/ml的对照品溶液。

2.1.2.2 线性关系考察

取对照品溶液0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0 ml, 加蒸馏水0.8, 0.6, 0.4, 0.2, 0 ml至1.0 ml。按“2.1.2.6”项下操作。以浓度为横坐标,吸光值为纵坐标绘制标准曲线,回归方程为:y=0.001x-0.1132,r2=0.9997。结果表明葡萄糖在201.8 μg/ml~1009 μg/ml呈良好的线性关系。

2.1.2.3 精密度实验

取一定浓度的葡萄糖对照品溶液,重复测量6次,吸光值的rsd为0.14%。

2.1.2.4 稳定性实验

取供试品溶液(蛹虫草3),分别在2,4,6,8,10,24,48 h进行测定,吸光值的rsd为1.69%,证明虫草中还原糖在48 h内稳定。

2.1.2.5 重复性实验

取1号冬虫夏草样品,分别称取6份,按2.1.1项下制备,按2.2.6项下测其吸光值,6份样品的还原糖含量的平均值为:1.60%,rsd为:3.82%。

2.1.2.6 样品还原糖测定

吸取供试品溶液1 ml至具塞试管中,加入3 ml dns试剂(3,5-二硝基水扬酸1%、重蒸苯酚0.2%、亚硫酸钠0.05%、氢氧化钠1%、酒石酸钾钠20%),沸水水浴15 min,迅速冷却至室温,在550 nm处测定吸光值。

2.1.3ρ品多糖的测定

样品中总糖含量减去样品中还原糖的含量即得样品多糖的含量,测定结果见表3。

2.2ω事洞嫉暮量测定

2.2.1χ哉掌啡芤褐票

称取甘露醇对照品,用蒸馏水配置成402.08 μg/ml的对照品溶液。

2.2.2ο咝怨叵悼疾

取对照品溶液0.1, 0.5, 1, 5, 10 ml加蒸馏9.9, 9.5, 9, 5, 0 ml至10 ml。按“2.2.7”项下操作。以浓度为横坐标,吸光值为纵坐标绘制标准曲线,回归方程为:y=0.0051x+0.0107, r2=0.9995。结果表明甘露醇在4.0208 μg/ml~402.08 μg/ml呈良好的线性关系。

2.2.3精密度实验

取一定浓度的甘露醇对照品溶液,重复测量6次,吸光值的rsd为0.21%。

蛹虫草于2009年被批准成为新资源食品,提取成分被用于食药两用,未提取的草体目前仅见于用于食品及保健食品领域,其中的提取成分蛹虫草菌粉被用于药·品领域!
[1]蛹虫草在保健品领域的应用请见方解蛹虫草保健品 栏目中详细介绍目前蛹虫草在保健品领域的应用!
冬·虫·夏·草为藏药材,食用需要谨慎或在医生的指导下服用,目前冬·虫·夏·草仅限用于药·品.
[1]冬·虫·夏·草在药·品领域的应用请见方解冬·虫·夏·草·药·品 栏目中详细介绍目前冬·虫·夏·草在药·品领域的应用!

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    2018-10-11 下午7:01 [回复]

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  3. 该评论为私密评论

    2018-10-09 上午3:50 [回复]

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