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蛹虫草口服液的制备工艺研究和临床初步观察

分类:虫草文献 作者:阳光虫草 评论:0 热度: 28,461 ℃

阳光虫草

蛹虫草口服液的制备工艺研究和临床初步观察

蛹虫草口服液的制备工艺研究和临床初步观察

【摘 要】目的:研究蛹虫草口服液的制备工艺与临床疗效。方法:采用正交实验设计法对蛹虫草的提取工艺进行优选,以加水量、提取时间、提取次数、提取温度、浸泡时间为影响因素进行正交实验,以虫草素的提出率(rc)和总提出物(rt)为考察指标,确定其最佳水提工艺。并将我院63例进行放化疗的肿瘤患者采用随机分组的方法分为虫草与防组、虫草治疗组和贞芪扶正冲剂对照组,以观察蛹虫草口服液在提高人体免疫力和肿瘤患者放化疗过程中的扶正减毒作用。结论:蛹虫草口服液的制备工艺为:蛹虫草加10倍量水,常温浸泡1h,80℃恒温提取3次,每次1h;提取液80℃以下浓缩,经醇沉、灭菌后灌装即得。而经63例临床病例的观察,蛹虫草口服液有提高免疫力,保护呼吸系统,减轻放化疗引起的骨髓抑制作用,并有辅助升高白细胞及血小板的功能。在肿瘤患者放化疗过程中的扶正减毒功效显著,值得临床推广。

【关键词】蛹虫草;工艺;临床研究;扶正减毒;放化疗

【中图分类号】s567.35 【文献标识码】a 【文章编号】1004―7484(2013)10―0464―02

冬虫夏草是珍贵的药用真菌,具有抑制肿瘤生长,增强机体免疫力等功能[1]。冬虫夏草自然资源极少,价格昂贵。蛹虫草(cordyceps militaris)又称北冬虫夏草,简称北虫草,与冬虫夏草同属异种,具益肺肾、补精髓、止血化痰等功效,在我国有悠久的用药历史。蛹虫草口服液一类新药的主要功效为抗肿瘤作用,研究结果显示,其中的核苷类物质对此疗效的发挥有较大的贡献,甚至起着至关重要的作用[2-3]。本文对该制剂的制备工艺研究进行了报道,并对其增强免疫力及抗肿瘤的临床疗效进行了初步观察。

1 制备工艺

1.1 材料

1.1.1 试剂

蛹虫草(石家庄柏林药材加工厂,批号:110910);虫草素对照品(fluka公司);甲醇为色谱纯,水为纯化水,其它试剂均为分析纯。

1.1.2 仪器

高效液相色谱仪,包括二元梯度泵、自动进样器、柱温箱、uv6000紫外检测器,数据处理工作站(美国waters公司);bs 224s电子分析天平(北京赛多利斯仪器有限公司);超声波清洗仪(上海超声仪器厂);hh-s恒温水浴锅(江苏国胜试验仪器厂)。

1.2 方法与结果

1.2.1 蛹虫草的提取工艺研究

蛹虫草目前多以超微粉直接口服使用,但由于生粉的微生物指标易超标,易造成轻微腹泻等原因,本研究采用水为提取溶剂,进行加热提取。拟以蛹虫草中主要活性成分虫草素提出率(rc)及总提取物得率(rt)为指标,采用正交实验法,研究蛹虫草的水提取最佳工艺。

1.2.2 正交实验方案设计

采用水为提取溶剂,以加水量(a)/提取时间(b)、提取次数(c)、提取温度(d)、浸泡时间(e)为影响因素,每个因素设3个水平,采用l18(37)正交设计表进行实验,如表1。

1.2.3 总提取物得率的计算方法

将一定量的蛹虫草粉末(w),按上述实验方案加水提取后,提取液挥干溶剂,低温减压干燥至恒重得总提取物(m),按以下公式计算总提取物得率rt(%):rt=m/w*100%。

1.2.4 标准曲线的绘制

采用反相高相液相色谱法测定蛹虫草含量,色谱条件为:色谱柱:elit sinochrom ods-ap(250mm×4.6mm,5μm);流动相:水-甲醇=87-13,流速0.8ml/min,检测波长260nm,柱温30℃。将虫草素标准品配制成浓度为3.42、17.1、34.2、51.3、68.4、85.5μg/ml的标准溶液,分别进样10μl,测定峰面积,以峰面积(a)对虫草素浓度(c)计算回归方程为:a=63760c-26583 (r=0.9993)。

1.2.5 虫草素含量测定方法

按1.2.3项下的方法得到干燥总提取物后,精密称取适量,加甲醇超声溶解定容,以0.22μm微孔滤膜压滤后进样10μl,以标准曲线计算虫草素浓度,按取样比例换算成每克生药中虫草素含量,计算虫草素的提出率rc(%)。

1.2.6 正交实验结果与分析

按照l18(37)正交设计方案进行18组样品的提取和分析,结果见表2。同时对实验结果进行方差分析,结果见表3。结果表明:以虫草素提出率(rc)为指标,影响因素c(提取次数)和d(提取温度)具有显著意义(p 0.05 )。

2.5.2 细胞免疫

20例患者服蛹虫草口服液前后细胞免疫状态情况见表3。患者服药后okt8。明显下降(p 0.05 )。说明蛹虫草口服液可减轻放化疗中患者临床症状, 其疗效同于贞芪扶正冲剂。放化疗对患者造血系统有抑制作用, 尤其可导致wbc下降。本结果显示, 在治疗前后对照组及治疗组wbc下降(p0.01 )。这表明预防使用蛹虫草口服液可对抗放化疗中wbc下降并保持rbc、hb的稳定; 有研究表明肿瘤患者细胞免疫功能较正常人明显低下[6]。放化疗使患者细胞免疫功能受到抑制, 总t细胞(okt3 ) 、t辅助细胞(okt4)减少, t抑制细胞(okt3) 增加, okt4/okt8比值降低, n k 活性降低, sil -zr增加[7]。患者细胞免疫功能与其预后有密切关系, 在肿瘤进展、转移和复发时, okt4/ okt8比值明显降低[8]。蛹虫草口服液具有选择性作用,t细胞亚群而发挥对细胞免疫功能的调节作用, 并且毒性低, 不影响骨髓与脾造血功能[9]。本结果显示服蛹虫草口服液后, 患者okt3、okt4变化不明显(p>0.0 5),okt8明显下降(p0.10), 说明蛹虫草口服液对放化疗肿瘤患者细胞免疫抑制有一定改善作用。

参考文献:

[1] zhou xiaoxia,meyer claudius u, schmidtke peter, et al. effect of cordycep in on interleukin - 10 p roduction of human peripheral blood mononuclear cells. eur j pharm acol, 2002, 453 (2 - 3) : 309.

[2] ahn yj, park sj,lee sg. cordycep in: selective growth inhibitor derived from liquid culture of cordyceps militaris against clostridium spp. j agric food chem , 2000, 48 (7) : 2744.

[3] kodama en,mccaffrey rp, yusa k, et al. antileukemic activity and mechanism of action of cordycep in against terminal deoxynucleotidyl transferase - positive ( tdt + ) leukemic cells. b iochem pharm acol, 2000, 59 (3) : 273.

[4] 马苓云, 等. 益气养阴法在肺癌中的应用. 山东中医学院学报[j]. 1996; 20(3): 178~179.

[5] 王维平, 等. 扶正养阴方治疗肺癌的临床研究. 江西中医学报[j]. 1997; 28(2): 24~25.

[6] lissoni p, barni s, resealdanir,et al. serum levels of solublein terleukin一2 receptors and their relation to lymphocyte subpopulation in patients with merastastic solid tumours. br j caneer,

1989, 60: 616.

[7] pillai r, balaram p, nair b s, et al. lymphocyte subset distribution after radiation therapy for cancer of the uterine cervix; possible prognostic implications and correlation with discase course. cancer, 1991; 67(8): 2071.

[8] muhonen t, hahka-kemppinen m, pakkala s, et al. decresing cd4/cd8 ratio during prolonged four-drug chemotherapy plus interferon treatment for metastastic melanoma plus interferon treatment for metastastic melanoma. j immunother, 1994; 15(1): 67.

蛹虫草于2009年被批准成为新资源食品,提取成分被用于食药两用,未提取的草体目前仅见于用于食品及保健食品领域,其中的提取成分蛹虫草菌粉被用于药·品领域!
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