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红景天、蛹虫草、大黄配伍治疗代谢综合征的实验研究ⅵ

分类:虫草文献 作者:阳光虫草 评论:1 热度: 28,304 ℃

阳光虫草

红景天、蛹虫草、大黄配伍治疗代谢综合征的实验研究ⅵ

红景天、蛹虫草、大黄配伍治疗代谢综合征的实验研究ⅵ

[摘要] 探讨红景天、蛹虫草、大黄配伍(中药复方ff)对1型糖尿病大鼠肾脏的保护作用。采用链脲佐菌素诱导sd大鼠形成1型糖尿病模型,按禁食血糖水平随机分为模型对照组(model)、胰岛素组(insulin)和ff治疗组。动态监测动物血糖、血脂水平和肾功能变化;10周后检测氧化应激水平。结果显示,连续给予中药复方 ff 能够明显降低1型糖尿病大鼠血糖、血脂水平;降低肾脏指数,降低血尿素氮水平、增加尿肌酐排出,降低尿酶活性和尿蛋白水平;使血清和肾脏中sod活性升高、mda含量降低。说明中药复方ff对1型糖尿病大鼠肾脏具有一定的保护作用,其机制可能与其降糖调脂、改善机体微循环及氧化应激水平等作用有关。

[关键词] 中药复方ff;糖尿病肾病;动态监测;氧化应激

[收稿日期] 2013-08-15

[基金项目] 国家“重大新药创制”科技重大专项(2009zxj09103-432,2012zx09103-101-063,2012zx09301-002-004)

[通信作者] 叶菲,tel:(010)83150495,e-mail:yefei@imm.ac.cn

[作者简介] 付健阳, e-mail:rr0543124@126.com

糖尿病肾病(diabetic nephropathy, dn)是常见的糖尿病并发症之一,是由于高血糖及高血脂所致的一系列代谢紊乱及血流动力学改变而导致的肾小球硬化症。中草药在糖尿病肾病治疗中具有一定的疗效。红景天可降低血糖,调节脂质代谢,并具有抗氧化应激和胰岛细胞保护作用,进而发挥糖尿病肾病保护作用[1];蛹虫草具有降血糖,改善肾脏滤过功能,减少胶原物质在肾脏中的积累的作用[2];大黄可以通过降低血脂水平,改善肾小球肥大及细胞外基质增生[3]。本研究以红景天为主要组分,配伍大黄和蛹虫草组成中药复方ff,在前期对其进行的降糖调脂改善微循环等研究基础上[6-8],进一步探讨中药复方ff对1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus, t1dm)大鼠肾脏的保护作用,为中药治疗dn提供新的思路。

1 材料

中性胰岛素注射液购自美国lily公司;链脲佐菌素(streptozocin, stz)购自sigma公司;总胆固醇(total cholesterol,tc)试剂盒、甘油三酯(triglyceride,tg)试剂盒购自中生北控生物科技股份有限公司;肌酐(creatinine,cre)试剂盒、尿素氮(blood urea nitrogen,bun)试剂盒购自北京北化康泰临床试剂有限公司;n-乙酰-β-d氨基葡萄糖甘酶(n-acety-beta-d-glucosaminidase,nag)、碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,alp)试剂盒购自上海太阳生物技术有限公司;糖化血清蛋白测定试剂盒购自上海名典生物工程有限公司;丙二醛(malondialdehyde,mda)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,sod)试剂盒购自南京建成生物工程研究所;大鼠尿微量白蛋白elisa试剂盒购自美国bd公司;考马斯亮蓝蛋白显色液购自美国bio-rad公司。其他试剂均为分析纯,购自北京北化精细化学品有限责任公司。

2 方法

2.1 动物模型建立及分组 雄性7周龄sd大鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司,合格证号scxk (京) 2007-001。适应性饲养1周后,腹腔注射stz 55 mg・kg-1(0.1 mol・l-1柠檬酸盐缓冲液,ph 4.7,4 ℃)。5 d后测定禁食血糖,选择血糖值≥16.7 mmol・l-1的动物作为糖尿病大鼠模型。根据禁食血糖水平将糖尿病大鼠分为3组(n=12):模型对照(model)组灌胃给予0.5% cmc-na,胰岛素(insulin)组皮下注射中效胰岛素2 u・d-1,治疗(ff)组灌胃给予中药组方ff 400 mg・kg・d-1。取6只同批大鼠作为正常对照(con)组,腹腔注射同体积溶剂柠檬酸缓盐冲液。

用东芝全自动生化仪测定禁食血糖、血清甘油三脂、总胆固醇、血清肌酐、血清尿素氮以及尿肌酐。采用对硝基酚法测定尿nag酶活性,alp酶活性。采用硝基四氮唑蓝 (nbt)比色法测定糖化血清蛋白;考马斯亮蓝法测定尿蛋白含量,elisa试剂盒测定尿白蛋白含量,计算尿白蛋白排泄量、尿白蛋白肌酐比率。第11周断头处死大鼠,计算肾脏指数,分别用代巴比妥酸法和黄嘌呤氧化酶法测定血清及肾的mda含量和sod活性。按下列公式计算内生肌酐清除率(creatinine clearance rate,ccr)、尿总蛋白排泄量 (urine protein excretion, upe)、尿白蛋白排泄量 (urine albumin excretion, uae)和尿白蛋白肌酐比率(urine albumin/creatinine ratio, uacr)。

ccr=尿肌酐浓度×12 h尿量/血清肌酐浓度/体重/720

upe=尿总蛋白浓度×12 h尿量

uae=尿白蛋白浓度×12 h尿量

uacr=尿白蛋白浓度/尿肌酐浓度

2.2 统计方法 数据以±s表示。所有数据均采用spss 11.0软件进行数据统计学分析。多组比较采用单因素方差分析(one-way anova),p 3.2 中药复方ff控制血糖作用 每周监测禁食血糖(fasting blood glucose, fbg),每3周测定糖化血清蛋白(glycosylated serum protein, gsp)。结果显示(图2),与con组比较,model组各时间点的禁食血糖、糖化血清蛋白均显著升高。与model组比较,insulin组从第1周开始血糖显著降低,糖化血清蛋白水平逐渐降低;第10周时,血糖、糖化血清蛋白较model组分别降低了75.5%,35.7%。 ff组血糖、糖化血清蛋白均逐渐降低,从第6周开始血糖水平明显低于model组;第10周时,血糖、糖化血清蛋

与con 组相比1)p2)p3)p4)p5)p6)p 组织测定结果显示(表3),与con组比较,model组肾脏sod活性显著性降低53.6%,mda含量显著性升高45.5%。与model组比较,insulin组

a.尿总蛋白排泄量;b.尿白蛋白排泄量;c.尿白蛋白肌酐比率。

图6 中药复方ff对t1dm大鼠尿蛋白的作用

fig.6 the effect of ff on proteinuria excretion in t1dm rats

sod活性升高了22.6%,mda含量降低了17.0%。ff组sod活性升高了6.5%,mda含量降低了18.3%。说明ff治疗能够改善糖尿病大鼠肾脏组织的氧化应激水平。

4 讨论

糖尿病肾病是糖尿病的重要并发症之一,约40%的糖尿病患者发生肾脏损害,成为导致终末期肾衰竭的首要疾病[4]。糖尿病肾病最初表现为微量白蛋白尿,随着病程延长,尿蛋白增加,肾脏排除血中毒素的能力逐渐减退,最终发展为终末期肾病(end阳光虫草阳光虫草

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stage renal disease,esrd)[5]。前期研究结果表明,中药复方ff在高脂饮食诱导的肥胖c57/6j小鼠和2型糖尿病kkay小鼠模型中,具有控制血糖调节血脂及改善微循环的作用[6-8]。本研究拟进 表3 中药复方ff对t1dm大鼠sod活性和mda含量的作用

table 3 the effect of ff on sod, mda and ages in t1dm rats

一步动态观察中药复方ff在防治糖尿病肾病中的作用,发现中药复方ff能够改善1型糖尿病大鼠受损的肾功能。

糖尿病肾病的早期诊断十分重要。尿微量白蛋白排出量uae,可以反映肾小球的损伤程度,因此被认为是糖尿病肾病诊断的“金指标”[9]。近年研究表明,尿总蛋白排泄量upe和尿白蛋白肌酐比率uacr在早期糖尿病肾病的诊断上也有应用意义[10]。此外,临床常采用血清及尿肌酐、尿素氮和内生肌酐清除率反映肾功能状态,尿nag酶活性和尿alp酶活性可以分别反映肾实质(尤其是近曲小管)损伤和肾小管上皮细胞损伤[11]。本研究发现,stz诱导的1型糖尿病大鼠肾脏功能受损,表现为血清肌酐、尿素氮水平升高,尿肌酐水平降低,尿酶(nag,alp)活性升高,尿蛋白(upe,uae,uacr)水平升高。中药复方ff能显著降低血清尿素氮水平,升高尿肌酐水平,降低尿uae,upe,uacr水平,降低尿alp酶活性。此外,肾脏肥大也是糖尿病肾病的主要病理表现,1型糖尿病大鼠模型出现明显的肾指数升高,中药复方ff能显著降低肾指数水平。说明ff对1型糖尿病大鼠的肾脏功能损伤具有一定的改善作用。

目前,对dn的治疗主要包括:控制血糖、调节血脂、控制血压等。高糖血症、高脂血症导致代谢异常和血流动力学改变是糖尿病肾病的主要发病机制,严格的血糖、血脂控制能够延缓dn的发生发展[12-13]。本研究中,中药复方ff能显著降低1型糖尿病大鼠的禁食血糖水平和糖化血清蛋白水平,并对高甘油三酯血症和高总胆固醇血症具有一定的调节作用,说明ff对1型糖尿病大鼠具有一定的降糖调脂作用。

糖尿病肾病是糖尿病的微血管并发症之一,微循环障碍是其基本的病理基础,肾脏血流动力学改变异常是dn微循环障碍的早期表现,在其发病中起关键作用[14]。先期研究表明,中药复方ff具有明显的改善机体微循环的作用,能够改善高脂饮食诱导的小鼠微循环障碍,逆转其肝脏红细胞流速和红细胞切变速率、肝窦开放数、白细胞滚动数等微循环变化[8]。因此笔者推测改善机体微循环作用可能是中药复方ff对t1dm大鼠发挥肾脏保护作用的重要机制之一。

氧化应激反应是糖尿病肾病的主要发病机制之一[15]。糖尿病状态下机体丙二醛(mda)含量增加,超氧化物歧化酶(sod)活性降低。本研究发现中药复方ff能一定程度升高血清和肾脏中sod活性,显著降低血清和肾脏中mda含量。说明中药复方ff可能通过抑制氧化应激反应进而改善糖尿病大鼠的肾脏功能。

总之,红景天、蛹虫草、大黄配伍的复方ff可能通过控制高糖血症和高脂血症、改善机体微循环、抑制氧化应激,进而对1型糖尿病大鼠肾功能具有一定的保护作用。

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investigation of compound, compatibility of rhodiola crenulata, cordyceps

militaris, and rhum palmatum, on metabolic syndrome treatment ⅵ

――improving hyperglycemia-mediated renal damage

fu jian-yang1, zhang xiao-lin1, tian jin-ying1, huang li-wei1, zhang pei-cheng2, ye fei1*

(1.beijing key laboratory of new drug mechanisms and pharmacological evaluation study, department of

pharmacology, institute of materia medica, chinese academy of medical sciences, beijing 100050, china;

2.state key laboratory of bioactive substance and function of natural medicines, institute of materia medica,

chinese academy of medical sciences, beijing 100050, china)

[abstract] this study is to investigate the effects of a chinese prescription (ff), compatibility of rhodiola crenulata, cordyceps militaris and rheum palmatum, on nephropathy in type 1 diabetic rats induced by streptozocin.according to fasting blood glucose level, diabetic rats were divided into three groups: model group, insulin-treated group and ff-treated group.parameters for evaluating the glucose & lipid metabolism and the renal function were monitored dynamically.levels of oxidative stress were detected ten weeks later.the results show that ff could significantly decrease the level of serum glucose and lipid profiles, improve the renal functions by decreasing blood urea nitrogen, urine albumin excretion and urease activity; ff could also affect on oxidative stress.in conclusion, chinese prescription ff could ameliorate hyperglycemia-mediated renal damage in type 1 diabetic rats.these effects may be related to its regulation on the metabolism of glucose and lipid, the microcirculation disturbance and the oxidative stress.

[key words] chinese prescription (ff); diabetic nephropathy; dynamic observation; oxidative stress

doi:10.4268/cjcmm20132233

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