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大洪山地区蛹虫草的分离驯化与鉴定

分类:虫草文献 作者:阳光虫草 评论:1 热度: 31,516 ℃

阳光虫草

大洪山地区蛹虫草的分离驯化与鉴定

大洪山地区蛹虫草的分离驯化与鉴定

摘要:以大洪山地区野生蛹虫草(corddcps militaris link.)为母本筛选优良菌种。结果表明,菌种d1、d3、d4平板培养性能较佳,菌丝致密健壮、气生菌丝少、匍匐状、转色快,转色深;菌种d1栽培产量最高达17.8 g/瓶,草体形态典型。菌种d1可作为大洪山本地优良菌种之一进行驯化。

关键词:蛹虫草(corddcps militaris link);分离驯化;鉴定;大洪山

中图分类号:s567.3 文献标识码:a 文章编号:0439-8114(2013)21-5248-03

isolation, domestication and identification of cordyceps militaris link. from dahongshan region

fang hua-zhou

(college of biotechnology, jingchu university of technology, jingmen 448000, hubei, china)

abstract: the experiment was carried out to screen excellent strains from wild cordyceps militaris link. in dahongshan region. results showed that the strain d1, d3 and d4 had good characteristics in the plate cultivation, compact and robust hyphae, procumbent, little aerial hyphae, color turned fast and dark. the yield of strain d1 was up to 17.8 g per bottle with typical grass performance and regarded as one of the excellent strains.

key words: cordyceps militaris link.; sepration and domestication; identification; dahongshan region

蛹虫草(corddcps militaris link.)又名北冬虫夏草、北蛹虫草等,为冬虫夏草近缘种,属麦角菌科(clavicipitaceae)虫草属(corddceps link)模式种,在我国分布广泛[1,2]。研究证实,蛹虫草营养丰富,具有与冬虫夏草相同或相似的功能及活性成分,虫草酸、虫草素、虫草多糖、超氧化物歧化酶(sod)、腺苷等含量接近或高于天然冬虫夏草,对消除疲劳、缓解紧张、提高人体免疫力、预防和治疗慢性支气管炎、肝炎、高血压、心脑血管疾病、肾炎肾衰、性功能障碍等具有良好的功效,被誉为虫草属真菌后起之秀,是冬虫夏草的理想替代品[1-5]。近年来,经我国科研人员多年努力,我国在世界上率先实现蛹虫草人工种植,目前已基本实现工业化生产[4,5]。研究和开发本地蛹虫草资源具有广阔的经济及市场前景。笔者在湖北省大洪山地区采集多株蛹虫草标本,并进行了分离驯化及栽培试验,现将有关情况报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

野生蛹虫草采集于湖北省大洪山风景区宝峰山下一处缓坡密林中,寄主昆虫及子实体基本完整,经鉴定为大洪山本地野生蛹虫草菌株。

马铃薯(市场购买)、蛋白胨(北京奥博星生物技术公司)、葡萄糖(化学纯,天津福晨化学试剂厂)、琼脂(北京奥博星生物技术公司)、磷酸二氢钾(化学纯,天津凯通化学试剂公司)、硫酸镁(化学纯,天津凯通化学试剂公司)、维生素b1(药店购买,湖北华中药业公司);250b型生化恒温培养箱(广东省医疗器械厂),lrh-250-gsii型微电脑人工气候箱(广东省医疗器械厂),fa2104型分析电子天平(上海良平仪器有限公司),sw-cj-1f型超净工作台(苏州净化设备有限公司),30 w移动式紫外灭菌灯(武汉延安医疗器械厂),tp22型普通摇床(中国科学院武汉科学仪器厂),dx-400a型高压蒸汽灭菌锅(上海三申医疗器械有限公司)。

1.2 培养基

改良pda固体培养基:马铃薯(去皮)200 g,葡萄糖20 g,蛋白胨5 g,磷酸二氢钾1 g,硫酸镁0.8 g,琼脂15 g,水1 000 ml,ph自然(实测值约6.5);pda液体培养基:可溶性淀粉30 g,葡萄糖10 g,蛋白胨10 g,磷酸二氢钾2 g,硫酸镁2 g,维生素b110 mg,水1 000 ml,ph 6.5;栽培岀草培养基:大米30 g,营养液45 ml。其中营养液配方:蚕蛹粉10 g,磷酸二氢钾1 g,硫酸镁0.8 g,维生素b110 mg,水1 000 ml,ph 7.5。各培养基[6-10]按常规方法配制,分别作为试管斜面、固体平板或液体培养基。

1.3 试验方法

1.3.1 菌种分离 野生蛹虫草流水洗去泥土,无菌水漂洗3~5次,取其子实体上半部分,以0.1%升汞溶液处理30 s、无菌水漂洗,以组织分离法切取1~2 mm大小组织块,转接至改良pda试管斜面,适宜温度培养,分离制备菌种[8,9]。

1.3.2 菌种性能与筛选 从各试管菌种挑取约1 mm大小菌种块,分别接种至改良pda平板培养基,适温黑暗培养5 d后光照培养5 d,比较观察各菌种菌株生长速度、菌丝形态、光照转色能力、光照培养菌丝形态等,选取菌丝长势好、健壮、转色快、转色深的菌株为初筛菌种。将初筛菌种转扩为液体菌种,按常规方法进行栽培试验,以实际栽培产量和草体形态为主要指标确定适宜菌种,并结合栽培过程全面检验和验证菌种性能[10]。上述试验各菌种菌株均5个以上重复,栽培出草20瓶重复。 2 结果与分析

2.1 菌种分离结果

共选取了6只野生蛹虫草为母本,各寄主均为鳞翅目昆虫幼体或蛹体,子实体形态较为典型,黄色至橘红色,直径3~4 mm、长3.5~5.0 cm,子实体经组织分离后制备菌种依次记为d1、d2、d3、d4、d5、d6;剔除遭感染试管,共成功分离37支菌种试管;其中d1试管9支、d2试管4支、d3试管6支、d4试管5支、d5试管6支、d6试管7支。

2.2 菌种培养性状与初筛结果

将菌种转接至平板培养基,模拟菌丝生长主要实际过程,观察其生长及发育情况。闭光培养可反映菌丝营养生长情况;见光培养可反映菌丝转色、出草等生殖生长情况[1,3]。试验结果见表1。

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