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蛹虫草鲁山株c0511菌丝液体培养条件

分类:虫草文献 作者:阳光虫草 评论:0 热度: 28,771 ℃

阳光虫草

虫草鲁山株c0511菌丝液体培养条件

蛹虫草鲁山株c0511菌丝液体培养条件

液体培养蛹虫草(cordyceps militaris)鲁山株c0511,以菌丝体产量为指标,对培养时间、接种量、温度和培养基起始ph进行单因素试验,结果表明,最佳培养时间为96 h,接种量为10%,适宜温度为22~26 ℃,ph为5.8。正交试验结果表明,影响蛹虫草菌丝液体培养的主次因素依次为培养温度、培养时间、接种量和ph。鲁山菌株c0511液体菌种按10%的接种量接入起始ph为7.0的液体培养基中,25 ℃培养96 h菌丝产量为30.13 g/l。

蛹虫草; 液体培养; 正交实验

蛹虫草[cordyceps militaris (l.) link ]又称北冬虫夏草,其所含药用成分和多种药效可与冬虫夏草相媲美[1~3]。由于自然资源的匮乏已满足不了社会需要,而人工栽培子实体周期长,对培养技术要求严格,故限制了虫草业的发展。液体发酵具有培养周期短、活性物质易提取等优点,很多药用真菌液体发酵产物的活性物含量远高于人工栽培的[4],所以液体培养是工厂化生产蛹虫草活性物的重要途径。但是由于蛹虫草菌株及培养条件等原因,使培养产物有诸多差异[5,6]。蛹虫草鲁山株c0511是从野生虫草中分离到的新菌株,为了更好地利用这一资源,笔者对其菌丝液体培养条件进行了探讨。

1 材料与方法

1.1供试菌株

蛹虫草(c. militaris)菌株 c0511为山东理工大学工厂化农业研究中心从野生虫草(采自山东省沂源县鲁山林场)子实体上分离得到的并能成功培养出正常子实体的菌株[7]。

1.2培养基

种子培养基(g/l):马铃薯 100,葡萄糖 20,大豆浸出液 50,琼脂 10,ph自然。

液体培养基(g/l):蔗糖 20,蛋白胨 25,kh2po4 1.5,mgso4 0.5,cacl2 0.25,维生素b1 0.15,ph自然。

1.3液体菌种制备

菌种在种子培养基上20 ℃恒温培养7 d后,取0.5 cm × 0.5 cm的菌块一块,接于装有30 ml液体培养基的100 ml三角瓶中,20 ℃、180 r/min培养2 d。

1.4培养条件的单因素选择

1.4.1培养时间的选择

将液体菌种接入装有100 ml液体培养基的500 ml三角瓶中,接种量10%,于20 ℃、180 r/min培养8 d,每24 h取100 ml培养物,1 776 g 离心15 min,沉淀用去离子水洗涤3次,60 ℃烘干至恒重测定菌丝体质量,计算菌丝体产量,确定最佳培养时间,设3个重复。

1.4.2接种量的选择

接种量设2.5%、5.0%、7.5%、10.0%、12.5%、15.0%、17.5%7个处理,培养时间为96 h,其余同1.4.1,确定最佳接种量。

1.4.3培养温度的选择

培养温度分别设为5、10、13、15、18、20、22、25、28、30、33、35和38 ℃,培养时间为96 h,其余同1.4.1,确定最佳培养温度。

1.4.4培养基起始ph值的选择

用1 mol/l的盐酸和1 mol/l氢氧化钠将液体培养基的起始ph值分别调为3.5、4.0、4.5、5.0、5.2、5.5、5.8、6.0、6.2、6.5、6.8、7.0、7.5、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0、13.0共19个处理,以ph自然为对照(ph为7.2),培养时间为96 h,其余同1.4.1。

1.5正交试验设计

在单因素试验的基础上,分别对培养温度、培养时间、接种量、培养基起始ph值进行4因素3水平的正交试验,试验因素和水平见表1。

宋越冬:蛹虫草鲁山株c0511菌丝液体培养条件

表1 液体培养条件正交试验设计

table 1 orthogonal test factors and levels

水平

levela培养时间

culture time (h)b培养温度

culture temperature (℃)c接种量

inoculum size (%)d起始ph值

initial ph

196237.55.8

21082510.06.4

31202712.57.0

2 结果与分析

2.1单因素试验结果

2.1.1培养时间

图1 培养时间对菌丝体产量的影响

fig.1 effect of culture time on mycelial yield in

submerged culture

图1表明随着培养时间的不同,菌丝体的产量也不同。从培养开始到24 h内,菌丝生长相对缓慢,肉眼基本看不到菌丝;1 d后,菌丝开始进入快速生长阶段,48 h时出现均匀的白色菌丝球;96 h时菌丝体产量最大,120 h后开始下降。

2.1.2接种量

不同接种量试验结果表明,当接种量 [4] 朱戎,陈向东,兰进. 药用真菌液体发酵研究进展[j]. 中药材,2003,26 (1) : 55 57.

[5] 李信,许雷. 蛹虫草胞外多糖发酵工艺优化[j].化工冶金,1998,19 (3) : 254 259.

[6] 温鲁,夏敏,宋虎卫,等. 液体培养蛹虫草虫草素和腺苷的代谢量[j] .微生物学通报,2005,32 (3) : 91 94.

[7] 宋越冬. 蛹虫草在槐尺蠖蛹上的接种试验[j].食用菌,2009,31(4):33 35.

朱丽娜

optimization of selected parameters affecting

mycelium production by cordyceps militaris,

strain lu shan c0511,in submerged culture

song yuedong

school of agriculture and food engineering,shandong science and technology university,

zibo,shandong 255049,china

monofactorial testing revealed that mycelial yields of cordyceps militaris (strain lu shan c0511) grown in submerged culture were maximal under the following conditions: culture temperature 22~26 ℃,incubation time 96 h,inoculum size 10% (v/v),medium ph 5.8. application of orthogonal testing revealed that mycelial yields were influenced predominantly by culture temperature,followed by incubation time,inoculum size,and the initial ph of the medium. when 10% (v/v) liquid spawn of strain lu shan c0511 was inoculated into medium adjusted to ph 7.0 and incubated at 25 ℃ for 96 h,the mycelium yield was 30.13 g/l.

蛹虫草于2009年被批准成为新资源食品,提取成分被用于食药两用,未提取的草体目前仅见于用于食品及保健食品领域,其中的提取成分蛹虫草菌粉被用于药·品领域!
[1]蛹虫草在保健品领域的应用请见方解蛹虫草保健品 栏目中详细介绍目前蛹虫草在保健品领域的应用!
冬·虫·夏·草为藏药材,食用需要谨慎或在医生的指导下服用,目前冬·虫·夏·草仅限用于药·品.
[1]冬·虫·夏·草在药·品领域的应用请见方解冬·虫·夏·草·药·品 栏目中详细介绍目前冬·虫·夏·草在药·品领域的应用!

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