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蛹虫草菌丝液体培养条件研究

分类:虫草文献 作者:阳光虫草 评论:1 热度: 26,360 ℃

阳光虫草

虫草菌丝液体培养条件研究

蛹虫草菌丝液体培养条件研究

摘 要:本试验对蛹虫草菌丝培养条件进行了研究,确定最佳的培养条件是:ph值7.0,振荡培养时间7天,培养温度22℃,培养基装液量100ml/瓶,摇床振频120~140r/min。菌丝体表现为菌球分布均匀,密度疏密适中,大小适宜,菌球组织紧实,干重可达到0.5g/100ml。

关键词:蛹虫草 液体发酵 菌丝干重

蛹虫草,是真菌和虫体相互结合的一种药用真菌,多寄生在鳞翅目蛹和幼虫体内。经研究,其营养价值和药用价值可以和冬虫夏草相媲美,甚至有些成分还要高于冬虫夏草。但由于冬虫夏草产量低,价格昂贵,所以蛹虫草的人工栽培显得尤为重要,且极具商业价值。[1]

经大量研究表明,人工液体发酵获得的虫草菌丝体和冬虫夏草的成分基本一致,可代替其入药。另外,在生产上液体菌种所发挥的功效显而易见,为研究蛹虫草液体发酵条件,本人进行了试验研究,现将试验结果报告如下:

一、材料和方法

1.材料

1.1菌种 蛹虫草固体菌种。

1.2主要仪器 高压蒸汽灭菌锅,恒温培养箱,远红外恒温干燥箱,分析天平等。

1.3培养基 (1)菌种活化培养基:马铃薯200g,葡萄糖20g,蛋白胨5g,磷酸二氢钾2g,硫胺素10mg,琼脂20g,水1000ml。(2)液w发酵培养基:葡萄糖20g,蛋白胨10g,硫酸镁1g ,磷酸二氢钾2g,硫胺素15mg,核黄素 15mg ,水1000ml。[2]

2.方法

菌种活化 将斜面固体菌种接种在活化平板培养基上, 20~22℃培养一周,菌丝长满平板后即可转色备用。

不同ph值对蛹虫草菌丝生长量的影响 按液体发酵培养基配方制备液体培养基,用1mol/l hcl或1mol/l naoh将培养基ph值分别调制4.0、5.0、6.0、7.0、8.0。液体培养基分装在250ml三角瓶内,每瓶100ml,各处理重复五次,常规灭菌。培养条件: 20~22℃,闭光,130r/min振荡培养。振荡培养7天后过滤菌液,菌丝用蒸馏水冲洗数次,60℃烘干称重。以下方法同1.2.2。

不同培养时间对蛹虫草菌丝生长量的影响 培养时间分别为5、6、7、8、9天。

不同培养温度对蛹虫草菌丝生长量的影响 培养温度分别为18、20、22、24、26℃。

不同装液量对蛹虫草菌丝生长量的影响 在250ml三角瓶中培养基装液量分别为80、100、120、140、160ml。

不同振频对蛹虫草菌丝生长量的影响 摇床振频分别为80、100、120、140、160r/min。

二、结果分析

1.不同ph值对蛹虫草菌丝生长量的影响

试验结果表明:不同ph值对蛹虫草菌丝生长量的影响不同。在其他条件相同的情况下,菌丝生长起始期其生长量随着ph值的升高而增加,当ph值为7.0时菌丝干重最大(0.4407g/100ml),菌球分布均匀,大小适中,密度最佳。达到8.0时菌丝生长量开始下降,菌球密度也明显减小。说明菌丝在弱酸条件下随着ph值升高而升高,而碱性条件对菌丝生长有抑制作用。[3]

2.不同培养时间对蛹虫草菌丝生长量的影响

菌丝在接种后2天内要经过一个适应期,接着会进入快速生长期,通过实验证明,培养7天的菌丝干重最高(0.5483g/100ml),在5~6天之间培养时间较短,菌丝快速生长期还未达到顶峰阶段,因此菌丝生长量较少,而8~9天菌丝培养时间过长,开始逐渐衰老自溶,菌球变大变松,产量下降。因此,多种因素综合考虑以培养7天最有利于菌丝的生长。

3.不同培养温度对蛹虫草菌丝生长量的影响

蛹虫草菌丝在15~30℃下均能生长,但温度的高低对菌丝的产量起着决定性的作用。实验表明在22℃时,菌丝干重最高。在18~22℃之间菌丝生长量随着温度的升高而增加,当温度达到26℃时,由于温度过高不适宜菌丝生长,所以菌丝产量较低。

4.不同装液量对蛹虫草菌丝生长量的影响

培养基装液量的多少直接影响振荡培养的效果,不同液体体积在规定空间(250ml)内的振荡效果差异较大,另外,较多的装液量也会给摇床增加负担。实验证明菌丝生长量随着装液量的增加而减少,两者呈反比,分析原因认为:装液量少时有足够的剩余空间为培养基提供溶氧,从而有利于菌丝生长。装液量在100ml时菌丝干重最大(0.4414g/100ml),装液量在120ml时菌丝生长量与100ml时差别不明显,但考虑到经济问题认为100ml为最佳。

5.不同振频对蛹虫草菌丝生长量的影响

试验结果表明:在相同时间内,振荡频率越大菌丝生长量越多,在120~140r/min之间时菌丝生长量最高,菌球也较为均匀,浓密,但当振荡频率到达160r/min时菌丝体结球状不好,出现块状菌丝聚集象限,不利于生长,因此,综合考虑以120~140r/min最为适合。

对实验结果分析来看,蛹虫草菌丝发酵始期阶段在弱酸条件下生长较好, ph值在7.0时菌丝生长量达到最高峰,超过7.0时菌丝生长量减少,菌丝产量减低;菌丝培养的最佳时间为7天,在第7天时测得菌丝干重最高,说明,菌丝以完成对数生长期,产量达到顶峰,如果继续培养,菌丝将进入衰老阶段,生长量不再增加;温度因素实验分析表明,在各处理之间菌丝产量没有差异,菌丝在18~26℃之间均能正常生长,但在22℃时菌丝产量最高;蛹虫草菌丝最佳的装液量为100ml/瓶,实验结果显示,当装液量在100ml时瓶内的溶氧量最高,对菌丝生长提供充足的氧分,菌丝生长量最高,菌丝质量最好。[4]

参考文献

[1]王建芳,杨春清.蛹虫草有效成分及药理作用研究进展.中医药信息,2005,22(5):30-32.

[2]邵爱娟,戴如琴,兰红丽.虫草菌丝的生理研究.中国中医药科技,1994,1(5):22.

[3]汪宇,于荣敏,佟志清.蛹虫草液体培养条件的优化及生长动力学考察.中国野生植物资源,2003, 22(4):56.

蛹虫草于2009年被批准成为新资源食品,提取成分被用于食药两用,未提取的草体目前仅见于用于食品及保健食品领域,其中的提取成分蛹虫草菌粉被用于药·品领域!
[1]蛹虫草在保健品领域的应用请见方解蛹虫草保健品 栏目中详细介绍目前蛹虫草在保健品领域的应用!
冬·虫·夏·草为藏药材,食用需要谨慎或在医生的指导下服用,目前冬·虫·夏·草仅限用于药·品.
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