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高原地区蛹虫草栽培关键技术

分类:虫草文献 作者:阳光虫草 评论:3 热度: 34,246 ℃

阳光虫草

高原地区蛹虫草栽培关键技术

高原地区蛹虫草栽培关键技术

摘 要:以现有条件下多年栽培示范蛹虫草为基础,总结归纳出适合高原地区气候条件的蛹虫草栽培关键技术,为高原地区蛹虫草人工栽培及技术推广提供依据。

关键词:高原地区;蛹虫草;栽培技术

中图分类号:q949.327.8 文献标识码:a

蛹虫草(也叫北虫草),学名为cordyceps militaris,虫草菌的一种,子囊菌亚门、麦角菌目、麦角菌科、虫草属的模式种[1],现已实现人工培育多年,人工栽培蛹虫草已成为全国不少地区,带动当地经济发展,帮助农民致富的好途径。同时,蛹虫草食用和药用价值可与天然的冬虫夏草媲美,它不仅在药效成分种类上与天然冬虫夏草相近外,而且是在已报道的350余种虫草菌中唯一能大量形成虫草素的种[1,2],因此它与天然冬虫夏草一样,能滋补人体,而且能有效地抑制肿瘤和病毒,并具有多种药理功能,是天然冬虫夏草的最理想代用品。

西藏农牧科学研究院蔬菜研究所食用菌课题组,自2009年引种栽培蛹虫草成功后,经检测发现,在高原地区栽培出的蛹虫草比内地

产的同种蛹虫草在虫草素含量高,说明特殊的高原气候有助于培育优质蛹虫草。在西藏天然虫草主产区,实现资源的可持续利用,必须改变当地农牧民受市场炒作影响,过分依赖天然资源,以破坏子孙后代生存环境为代价的致富方式,转向重点发展稳定、优质、高产蛹虫草菌株及配套栽培技术的普及和推广,对于帮助农牧民致富,提升当地产业服务社会,带动当地经济发展有重要意义。

1 种源

选择适应性强、出草率高的种源,是蛹虫草栽培成功的关键,在西藏拉萨栽培多年发现,菌种经连续转管,长期冷藏保存导致菌种退化,不转色,甚至不出草,目前内地业界也频频出现这类困境。

种源的质量,单从菌种表面难以鉴定,必须通过“出草”试验。经过几年的栽培试验,总结出试管固体母种,生产用液体原种,大米栽培种三级菌种扩繁体系。如图所示:

图1 三级菌种扩繁体系

1.1 原原种制备

在超净工作台上,酒精灯外焰处揭开封口膜,选取新鲜、生长正常、形态健壮、颜色橙黄或橘红色的栽培蛹虫草或野生蛹虫草子座,用无菌镊子取尖端,置于pda试管固体斜面培养基(马铃薯200.0g,葡萄糖20.0g,琼脂20.0g,水1000ml)上,于25℃培养3d,剔除有杂菌污染的试管,连续观察7~10d直至长满整个试管斜面,如菌丝生长均匀一致,无明显白色绒毛状气生菌丝,经室内散射光照射,菌苔为橘黄色或橘红色,即为原原种-- f0级,如斜面生长不均匀,需进行纯化转接。

1.2 纯化转接

在超净工作台上,酒精灯外焰处用无菌接种铲挑取原原种--f0级0.5cm2大小菌种块,转接于平皿固体pda培养基中央,18℃~23℃培养7~10d,观察菌丝生长势和均匀度,留存菌丝生长均匀一致,无明显白色绒毛状气生菌丝,经室内散射光照射,菌苔为橘黄色或橘红色的平皿,转接制备试管母种--f1级。

1.3 控制试管母种转管次数

如果种源是引进的菌种,即试管母种--f1级,原则上应直接用于生产液体原种。但大多数从业者为了留存菌种,转接很多管,即试管母种--f2级用于生产液体原种,并将其一部分冷藏于3℃~8℃(保存期为3个月),需要使用时再转接活化为试管母种--f3级,试管母种转管不得超过3次。

1.4 生产用液体原种制备

由试管母种转接,一支扩3~5瓶,每瓶1cm2菌种块3~5块,18℃~23℃条件下避光培养,一般往复式摇床60~70次/min,旋转式摇床100~120转/分钟,振荡培养时间为4~6d,静置培养时间为7~10d。菌液澄清透明,菌球在菌液中分散均匀、无上浮、无沉淀,挂瓶壁的菌丝短绒毛状,淡黄色,且有蛹虫草独有的菌香味、无异味。

1.5 大米栽培种制备

由生产用液体原种转接,一瓶扩20~50瓶,连续注射器,接种量4~10ml喷洒大米料面。18℃~23℃条件下避光培养,3~5d菌丝白色浓密、洁白、均匀发至瓶底,无绒毛状气生菌丝,无杂菌;培养基表面出现一些小小隆起时,增加光照,促进转色。每天通风见光时间在10h以上,如果光照不足,可用日光灯补光(晚上开灯,白天不开灯),相对湿度60%~70%,维持5~10d,料面上有小米粒状原基凸起(即原基分化),说明转色成功。转色后则应停止人工补光,不宜连续日照,否则不容易长出子座。

为验证分离菌种是否为所需菌种,把分离得到的菌种回接到大米培养基上进行出草试验,接种后发菌速度快,无杂菌,能转色、分化原基至子座成熟,整个周期不超过50~60d,出草整齐,草型好(直立无簇生),生物转化率高(每瓶鲜草>10g)。

2 培养基制备

培养基的质量决定出草产量和品质。合理的基质碳氮比(c/n)是人工栽培北虫草的必需条件,否则,将导致或者菌丝生长缓慢、或者污染严重、或者气生菌丝过旺,难以发生子座,即便有子座分化,其产品数量和质量均有不同程度的下降。生产中一般以调在c/n 3~4:1之间为宜[1,2]。

2.1试管固体母种(f1级以上)培养基配制与分装

培养基配方:马铃薯200.0g,葡萄糖20.0g,蛋白胨10.0g,磷酸二氢钾3.0g,硫酸镁1.5g,维生素b1 10.0mg,琼脂20.0g,水1000ml,ph值6.0~7.0。

培养基配制与分装:按配方称好各种原料,将马铃薯洗净去皮去芽眼(出芽、变绿禁用),称取200g,切成3~5mm薄片,加水1000ml,文火煮沸20~30min,用4层纱布过滤,滤液放回锅内,加入琼脂充分溶化,再依次加入其它成分,搅拌溶解后,加开水补足至1000ml,趁热分装试管,装量为试管的1/4~1/5,塞入胶塞。

2.2 生产用液体原种培养基配制与分装 培养基配方:马铃薯200.0g,葡萄糖20.0g,蛋白胨10.0g,酵母膏5.0g,磷酸二氢钾3.0g,硫酸镁1.5g,水 1000ml,ph值6.0~7.0。

培养基配制与分装:按配方称好各种原料,将马铃薯去皮去芽眼,称取200g,切成3~5mm厚的薄片,文火煮沸20~30min,用8层纱布过滤,滤液用开水补足至1000毫升,再依次加入其它成分,搅拌溶解,然后装入三角瓶或玻璃输液瓶中,液体装量不宜超过容器总容积的2/5,瓶口用硅胶塞或乳胶圈封口。

2.3大米栽培种培养基配方

大米营养液配方:葡萄糖10g,蛋白胨10g,蚕蛹粉10g,磷酸二氢钾3g,硫酸镁1.5g,维生素b1 10mg,水1000ml,ph值6.0~7.0。

分装:按配方称好各种原料,充分搅拌使其溶化,文火煮沸20~30min,用8层纱布过滤,分装于洗净的罐头瓶中,每瓶装25~30ml,每瓶加入生大米20~25g,培养基装瓶后,一般用聚丙烯塑料薄膜封口,外套橡皮圈。

2.4 培养基制作需注意的问题

料水比不大于1:1.5,料水比太大,会影响菌丝呼吸作用容易早衰;太小,菌丝吃不透料,后期营养不够而抑制生长;ph值,蛹虫草适酸性环境,菌丝生长阶段适应5~7的基质,最适5.2~6.8之间,人工栽培生产时,基质ph可调到7~7.5,经高压灭菌后,ph值自然下降,菌丝的生长(产生有机酸)自然调节,可使基质ph降至6左右。

3 灭菌

拉萨市海拔3650m,低气压导致水的沸点只有86℃,本地食用菌栽培户多采用常压蒸汽灭菌,灭菌时间至少保持在36h以上,栽培袋里的栽培料才能蒸透,大米栽培瓶很难在常压下蒸透蒸熟,费时费力,燃料成本不可避免;采用高压灭菌,速度快,灭菌彻底,但高压灭菌锅投资大,单次灭菌数量少,连续工作量大,一般试管种固体培养基和液体种培养基均在高压锅灭菌,灭菌温度121℃~126℃,时间保持30min;为此,采用中压灭菌方法在高原低压地区较为实际,灭菌温度110℃~115℃,大米不像麦子,容易吸水,不易松动,随着灭菌量的加大,相应延长灭菌时间,灭菌时间不得少于4h。另外,灭菌时应注意装瓶不能过紧,要留有一定的空隙度,使蒸汽流畅而不产生死角,灭菌彻底。

4 接种

接种必须在无菌状态下进行。连续注射器硅胶管用高锰酸钾浸泡过夜。在超净工作台上操作,连续注射器(忌高压灭菌)用高锰酸钾、75%酒精、无菌水依次过滤,硅胶管一头插入三角瓶液体菌种液面以下,接种针在酒精灯外焰灼烧,晾凉,打出空气,初始液体菌种废弃,插入接近瓶口边缘,注射器喷嘴向下,让液体菌种均匀喷洒大米料面,一般连续注射器为2ml为一次注射量,每瓶不超过5次注射即可,过多会在瓶底积水,不利于菌丝向下延展。

5 菌丝培养

必须避光培养,最适菌丝生长温度为18℃~23℃,经3~7d大米培养基菌丝长满至瓶底。如条件许可,通过2~3d的日光灯昼夜人工补光,或利用拉萨日光资源,将大米栽培瓶移至光线较强的地方使菌丝迅速转色,料面呈橘黄色或橘红色为正常。

拉萨气候冷凉,夏无酷暑,冬无严寒,每年5月~10月期间非常适合菌丝培养,因拉萨气候干燥,适当注意培养室加湿保湿。

蛹虫草是一种介于好气菌与嫌气菌之间的一种真菌[2]。因此,在各级菌种扩繁过程中,注意菌丝培养的空间空气新鲜,西藏本来地处高海拔低气压地区,空气含氧量绝对低于其他地区,如不注意通风换气,极易发生气生菌丝或营养生长过旺,菌丝早衰,不易出草。

6 出草管理

转色成功后,松动瓶口封口膜,但不揭开封口膜,以利增氧,或封口膜上扎孔(孔径不超过2mm,1~3个即可)通气,并加强室内通风,保持新鲜空气,同时应减少光照时间,利用室内自然散射光即可;保持室内温度在20℃~25℃,适当调控温差在24h内5℃~10℃的范围,控制相对湿度在65%~85%,否则将会使料面产生过多的气生菌丝,不利于出草。子实体刚出现时,是形如小米粒的橘黄色原基,此时注意地面保湿和墙壁保湿,在四周、通风窗口挂湿帘并喷透水,若在温室大棚和其他吊蔓蔬菜作物套种栽培,保湿效果很好。3~5d后,原基逐渐伸长,最后形成下粗上细的橘黄色棒状子座,成熟时顶端开始膨大。当子座了出现萎缩时,就不再生长,即可采收。

7 栽培方式

合理的培养方式是降低成本和提高品质的关键。内地的栽培户基本上都还是采用瓶栽,而瓶栽的成本中人工占主要比例,从开始栽培到采收,要经过洗瓶--装料--封口--灭菌--接种--上架--取口--采收,每个环节都要一瓶一瓶的做,特别是在每瓶的小空间采收,都需要大量的人工[2]。

在西藏,适合庭院式出草管理,盆栽或盒栽等大料块栽培方式较为实际。只需把握好灭菌和接种环节,培养基因颗粒间比较疏松,就发菌快,吃料均匀,菌丝粗壮活力强,感染率低。后期管理开放式,空间大,氧气充足,原基分化的好,草长的密、粗、长。

附图

转色不好的菌种 正常的菌种

液体菌种静置培养 液体接种(连续注射器)

接种 正常发菌

气生菌丝不利于原基分化 出草

出草整齐 氧气通风不良

参考文献

[1]黄年来,林志彬,陈国良等著.中国食药用菌学[m].上海科学技术文献出版社.2010年.1761-1769.

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