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冬虫夏草抑制肝纤维化的临床研究

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阳光虫草

冬虫夏草抑制肝纤维化的临床研究

冬虫夏草抑制肝纤维化的临床研究

【摘 要】目的:探讨冬虫夏草的抗肝纤维化作用机制。方法:将80例患有慢性肝纤维化的患者分为对照组和治疗组,在常规护肝治疗基础上,治疗组40 例患者给予冬虫夏草口服液12周,观察两组治疗前后肝功能指标和肝纤维化指标;通过肝穿刺后免疫印迹技术检测collagenⅰ、collagenⅲ和mmp-13的变化。结果:两组治疗后肝功能均明显改善;治疗组治疗后肝纤维化指标明显低于对照组治疗后;两组治疗后collagenⅰ和collagenⅲ显著降低,mmp-13显著增加,但ccf治疗组改善更显著。结论:冬虫夏草通过降低collagenⅰ和collagenⅲ,提高mmp-13起到抗肝纤维化的作用。

【关键词】肝纤维化;冬虫夏草;胶原;基质金属蛋白酶-13

肝纤维化(hepatic fibrosis)是机体对慢性肝损伤的一种修复反应,是一种渐进的病理过程,是慢性肝病的共有病理变化。肝纤维化的特征改变是肝脏内细胞外基质( extracellular matrix, ecm)的过度增生和异常沉积,严重者的肝纤维化可导致肝硬化,甚至引起肝功能衰竭[1]。目前从肝纤维化发生发展的不同环节入手研制了许多抗纤维化药物,但仍未有十分确定。因此,寻找理想的抗肝纤维化药物及有关肝纤维化发病机制的阐明,具有重要的理论和临床意义。

冬虫夏草(chinese caterpillar fungus,ccf)是从是麦角菌科真菌冬虫夏草寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体,研究显示冬虫夏草有防止肝纤维化的作用[2],但其作用机制未完全明确。本研究从通过临床试验探讨冬虫夏草抗肝纤维化的作用机理,为冬虫夏草的临床防治肝纤维化提供指导。

1 材料与方法

1.1病例资料及分组

选择2010年1月至2012年2月在本院住院的患有慢性肝纤维化的患者80例,随机分为治疗组和对照组。对照组40例,男性32例,女性8例,平均年龄(41.3±6.7)(35-46)岁;治疗组40例,男性33例,女性7例,平均年龄(39.8±5.8)(36-43)岁。两组病例在年龄分布、性别分布和治疗前肝功能检测比较差异均无统计学意义(p>0.05),具有可比性。

1.2治疗方法

两组患者均给予常规护肝治疗及支持治疗等治疗。治疗组在一般治疗的基础上口服冬虫夏草口服液25ml,每天1次,疗程12周,治疗期间均不加用其它抗肝纤维化的药物。

1.3观察指标

1.3.1 血清学检查

对照组和治疗组所有患者抽取静脉血3ml,经离心机离心后分离血清,送化验室检测。

1)检测肝功能指标

利用全自动生化分析仪检测丙氨酸转氨酶(alt)、谷草转氨酶(ast)、白蛋白(alb)和总胆红素(tbil)的变化。

2)检测肝纤维化指标

利用放免分析法检测透明质酸(ha)、层黏蛋白(ln)、ⅲ型前胶原肽(pc-ⅲ)和ⅳ型胶原(cⅳ)的变化。

1.3.2 肝穿刺后ⅰ型胶原(collagenⅰ)和ⅲ型胶原(collagenⅲ)检测

对照组和治疗组各8名患者经局部麻醉,在ct的定位和引导下经皮穿刺,获取肝脏标本约20毫克。将肝组织入4℃裂解液匀浆15 min,4℃离心,取上清,bradford法测定肝组织蛋白浓度。肝组织蛋白经12%sds-page凝胶电泳分离,转移至pvdf膜,脱脂奶粉室温封闭2 h,1:300稀释的collagenⅰ抗体、collagenⅲ抗体和mmp-13抗体4℃过夜,二抗(1:3000稀释)与硝酸纤维素膜杂交。将膜置于ecl中1min,曝光,显影,定影。采用ipp6.0图像分析软件对western blot结果进行定量分析,结果以目的蛋白与β-actin的累积光密度值的比值表示。

1.4 统计学分析

所有数据以x? ± s 表示,采用spss13.0软件进行t检验,p0.05)(table1)。

2.2肝纤维化指标

统计学分析显示对照组治疗后血清ha、ln、pc-ⅲ和cⅳ水平较治疗前无统计学差异(p>0.05);治疗组治疗后ha、ln、pc-ⅲ和cⅳ水平与治疗前相比均显著降低表现为治疗组治疗后ha、ln、pc-ⅲ和cⅳ水平比治疗前分别降低39.9%(p 3 讨论

本实验通过血清学检测发现,对照组和治疗组治疗后alt、ast和tbil水平降低,alb水平显著增加,提示两种治疗方法均有效的改善了肝功能。肝纤维化指标显示冬虫夏草治疗组治疗后ha、ln、pc-ⅲ和cⅳ水平与对照组治疗后相比均显著降低,而对照组治疗后没有显著改变,暗示冬虫夏草具有改善肝纤维化的功能,对肝细胞具有保护作用。免疫印迹结果显示两种治疗方法均降低collagenⅰ和collagenⅲ,提高了mmp-13水平,而冬虫夏草治疗组治疗后collagenⅰ和collagenⅲ水平低于对照组治疗后,mmp-13水平高于对照组治疗后,提示冬虫夏草改善肝纤维化的机制可能通过降低collagenⅰ和collagenⅲ,提高mmp-13起到对肝细胞的保护作用。

研究显示,肝星状细胞(hepatic stellate cell, hsc)的激活认为是肝纤维化过程中最重要的一步[3]。hsc激活并转化为肌成纤维细胞样细胞,通过增生和分泌细胞外基质参与肝纤维化的形成[4],因此各种致纤维化因素均把肝星状细胞作为最终靶细胞。冬虫夏草有调节免疫系统功能、抗肿瘤、抗疲劳等多种功效。有研究报道,pdgf对hsc增殖有显著促进作用,虫草菌丝可显著抑制纤维化肝脏pdgf的表达[5]。但其具体机制尚不清楚。本课题从另一个角度分析,冬虫夏草可以通过降低collagenⅰ和collagenⅲ,提高mmp-13,起到抑制肝纤维化的作用。

细胞外基质包括胶原、糖蛋白及蛋白多糖等,其中胶原是最主要的成分,在肝脏中有ⅰ型,ⅲ型-ⅵ型共5型,而以ⅰ型和ⅲ型为主。肝脏调控胶原代谢的关键酶是基质金属蛋白酶(mmps),其中mmp13是基质金属蛋白酶家族中对肝脏胶原降解作用较强的酶[6]。本研究中通过免疫印迹观察到的冬虫夏草治疗后collagenⅰ和collagenⅲ的降低,mmp-13的增高效果明显高于一般治疗,证实冬虫夏草抑制了肝星状细胞的激活,降低了collagenⅰ和collagenⅲ的合成,提高了mmp-13的表达,缓解了肝纤维化过程。

因此,本研究通过临床实验研究发现,冬虫夏草口服液作为一种中药制剂能够抑制肝星状细胞的激活,降低了collagenⅰ和collagenⅲ的合成,提高了mmp-13的表达,缓解肝纤维化过程,为冬虫夏草临床防治肝纤维化提供了新的理论依据。

参考文献:

[1] fallowfield j, hayes p. pathogenesis and treatment of hepatic fibrosis: is cirrhosis reversible[j]? clin med, 2011, 11(2):179-183.

[2] 王要军, 孙自勤, 权启镇, 等. 冬虫夏草治疗肝纤维化的临床疗效 [j]. 前卫医药杂志, 1996, 13(2): 70-71.

[3] reeves hl, friedman sl. activation of hepatic stellate cells-a key issue in liver fibrosis [j]. front biosci. 2002, 7: d808-826.

[4] dennler s, huet s, gauthier jm. a short aminoacid sequence in mh1 domain is responsible for functional differences between smad2 and smad3 [j]. oncogene, 1999, 18: 1643-1648.

[5] 迟晶, 付宝玉,李玉玲. 细胞因子与肝纤维化 [j]. 日本医学介绍, 1997, 18(8): 377-378.

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